د BDDE کراس تړل شوي آټوکلیو کې د محصولاتو نوي عکس العمل کشف کول

جاواسکریپټ اوس مهال ستاسو په براوزر کې غیر فعال دی.کله چې جاوا سکرپٹ غیر فعال وي، د دې ویب پاڼې ځینې دندې به کار ونکړي.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgenia Ranneva, Philippe Deprez Department of Science, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalonia, Spain * دا لیکوالان پدې کار کې یو څه بصیرت لري مساوي د ونډې شالید: هایالورونیک اسید (HA) یو طبیعي پیښیږي پولیساکریډ دی چې د جمالیاتي موخو لپاره د ډرمل فلرونو په تولید کې کارول کیږي.څرنګه چې دا د انسان په نسجونو کې د څو ورځو نیم ژوند لري، د HA-based dermal fillers په کیمیاوي ډول تعدیل شوي ترڅو په بدن کې خپل ژوند اوږد کړي.په تجارتي HA-based fillers کې ترټولو عام تعدیل د 1,4-butanediol diglycidyl ether (BDDE) کارول دي چې د کراس لینک کولو اجنټ په توګه د HA زنځیرونو کراس لینک کولو لپاره.پاتې یا غیر عکس العمل BDDE په هر ملیون (ppm) کې <2 برخې غیر زهرجن ګڼل کیږي؛له همدې امله ، د وروستي ډرمل فلر کې پاتې پاتې BDDE باید د ناروغ خوندیتوب ډاډ ترلاسه کولو لپاره اندازه شي.مواد او میتودونه: دا څیړنه د مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري (LC-MS) په یوځای کولو سره د الکلین شرایطو لاندې د BDDE او HA ترمینځ د کراس لینک کولو عکس العمل د ضمني محصول کشف او ځانګړتیا تشریح کوي.پایلې: د بیالبیلو تحلیلونو وروسته، دا وموندل شوه چې د الکلین شرایط او د تودوخې لوړه درجه چې د HA-BDDE هایدروجیل غیر منتن کولو لپاره کارول کیږي د دې نوي فرعي محصول، د "پروپیلین ګلایکول په څیر" مرکب رامینځته کولو ته وده ورکوي.د LC-MS تحلیل تایید کړه چې ضمني محصول د BDDE په څیر ورته مونوسوټوپیک ډله لري، د ساتلو مختلف وخت (tR)، او یو مختلف UV جذب (λ=200 nm) حالت.د BDDE برعکس، دا د LC-MS تحلیل کې لیدل شوي چې د ورته اندازه کولو شرایطو لاندې، دا ضمني محصول په 200 nm کې د کشف لوړه کچه لري.پایله: دا پایلې ښیي چې د دې نوي مرکب په جوړښت کې هیڅ ایپوکسایډ شتون نلري.بحث د دې نوي فرعي محصول خطر ارزولو لپاره خلاص دی چې د سوداګریزو موخو لپاره د HA-BDDE هایدروجیل (HA dermal filler) په تولید کې موندل شوي.کلیدي ټکي: هایالورونیک اسید، د HA ډرمل ډکونکی، کراس تړل شوی هایالورونیک اسید، BDDE، LC-MS تحلیل، د BDDE ضمني محصول.
د هایالورونیک اسید (HA) پراساس ډکونکي خورا عام او مشهور ډرمل ډکونکي دي چې د کاسمیټیک موخو لپاره کارول کیږي.1 دا ډرمل فلر یو هایدروجیل دی، معمولا د 95٪ اوبو او 0.5-3٪ HA څخه جوړ شوی، کوم چې دوی ته د جیل په څیر جوړښت ورکوي.2 HA یو پولیساکریډ دی او د فقرو د بهر حجرو میټرکس اصلي برخه ده.د اجزاو څخه یو.دا (1,4)-ګلوکورونیک اسید-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) تکراري ډیساکرایډ واحدونه لري چې د ګلایکوسیډیک بانډونو لخوا وصل شوي.دا د ډیساکرایډ نمونه په ټولو ژوندی موجوداتو کې یو شان ده.د ځینې پروټین پراساس ډکونکي (لکه کولیګین) سره پرتله کول ، دا ملکیت HA خورا لوړ بایوکمپیټیبل مالیکول جوړوي.دا ډکونکي کولی شي د امینو اسید ترتیب ځانګړتیا وښیې چې ممکن د ناروغ معافیت سیسټم لخوا پیژندل شوي وي.
کله چې د ډرمل فلر په توګه کارول کیږي، د HA اصلي محدودیت په نسجونو کې د هغې ګړندۍ بدلون دی چې د انزایمونو د ځانګړي کورنۍ شتون له امله چې د هایالورونایډیس په نوم یادیږي.تر اوسه پورې، د HA جوړښت کې ډیری کیمیاوي تعدیلات تشریح شوي چې په نسجونو کې د HA نیمایي ژوند زیاتوي.3 ډیری دا تعدیلات هڅه کوي چې د هایالورونایډیز لاسرسۍ د پولیساکریډ پولیمر ته د HA زنځیرونو سره د نښلولو په واسطه کم کړي.له همدې امله، د HA جوړښت او کراس لینک کولو اجنټ تر مینځ د پلونو او انټرمولکولر کووالنټ بانډونو رامینځته کیدو له امله ، کراس سره تړلی HA هایدروجیل د طبیعي HA په پرتله ډیر د انزایم ضد تخریب محصولات تولیدوي.4-6
تر دې دمه، د کراس لینک شوي HA د تولید لپاره کارول شوي کیمیاوي کراس لنکینګ اجنټان عبارت دي له میتاکریلامایډ، 7 هایډرازایډ، 8 کاربوډیمایډ، 9 ډیویینیل سلفون، 1,4-بوتانیدیول ډیګلیسیډیل ایتر (BDDE) او پولی (ایتیلین ګلایکول) ډیګلیسیډیل ایتر.10,11 BDDE اوس مهال ترټولو عام کارول کیږي د کراس لینک کولو اجنټ.که څه هم دا ډول هایدروجیلونه د لسیزو لپاره خوندي ثابت شوي، د کراس لینک کولو اجنټ کارول شوي تعامل کونکي ریجنټونه دي چې کیدای شي سایټوټوکسیک وي او په ځینو مواردو کې، متوجینیک وي.12 له همدې امله په وروستي هایدروجیل کې د دوی د پاتې کیدو مینځپانګه باید لوړه وي.BDDE خوندي ګڼل کیږي کله چې د پاتې کیدو غلظت په هر ملیون (ppm) کې د 2 برخو څخه کم وي.4
په HA هایدروجیلونو کې د ټیټ پاتې شونو BDDE غلظت ، د کراس لینک کولو درجې او بدیل موقعیت موندلو لپاره ډیری میتودونه شتون لري ، لکه د ګاز کروماتګرافي ، د اندازې جلا کولو کروماتګرافي د ډله ایز سپیکرومیټري (MS) سره یوځای ، د اټومي مقناطیسي ریزونانس (NMR) فلوروسینس اندازه کولو میتودونه ، او د ډایډ سري د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي (HPLC) سره یوځای شوی.13-17 دا څیړنه په وروستي کراس پورې تړلي HA هایدروجیل کې د ضمني محصول کشف او ځانګړتیا تشریح کوي چې د الکلین شرایطو لاندې د BDDE او HA عکس العمل لخوا تولید شوي.HPLC او د مایع کروماتګرافي - ډله ایز سپیکرومیټري (LC-MS تحلیل).څرنګه چې د BDDE د دې ضمني محصول زهر معلوم نه دی، موږ سپارښتنه کوو چې د پاتې شونو مقدار باید په ورته ډول وټاکل شي چې معمولا په وروستي محصول کې په BDDE کې ترسره کیږي.
د HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) ترلاسه شوي سوډیم مالګه د ~ 1,368,000 Da (Laurent method) 18 مالیکولر وزن لري او د 2.20 m3/kg داخلي ویسکوسیت لري.د کراس لینک کولو غبرګون لپاره، BDDE (≥95٪) د سیګما-الډریچ شرکت (سینټ لوئس، MO، USA) څخه اخیستل شوی.د فاسفیت بفر شوی مالګین د pH 7.4 سره د Sigma-Aldrich شرکت څخه پیرودل شوی.ټول محلولونه، اکټونیټریل او اوبه چې د LC-MS تحلیل کې کارول کیږي د HPLC درجې کیفیت څخه اخیستل شوي.فارمیک اسید (98٪) د ریجنټ درجې په توګه اخیستل کیږي.
ټولې تجربې د UPLC اکویټ سیسټم (واټرز، میلفورډ، MA، USA) کې ترسره شوي او د API 3000 triple quadrupole mass spectrometer سره وصل شوي چې د الیکٹرو سپری ionization سرچینې (AB SCIEX, Framingham, MA, USA) سره سمبال شوي.
د کراس سره تړلي HA هایدروجیل ترکیب د 1٪ الکالي (سوډیم هایدروکسایډ، NaOH) په شتون کې د 10٪ (w/w) سوډیم hyaluronate (NaHA) محلول ته د 198 mg BDDE په اضافه کولو سره پیل شو.د غبرګون په مخلوط کې د BDDE وروستی غلظت 9.9 mg/mL (0.049 mM) و.بیا، د عکس العمل مخلوط په بشپړه توګه مخلوط او همغږي شو او اجازه ورکړل شوه چې په 45 ° C کې د 4 ساعتونو لپاره پرمخ ولاړ شي.19 د عکس العمل pH په ~12 کې ساتل کیږي.
بیا وروسته، د عکس العمل مخلوط په اوبو سره مینځل شوی، او وروستی HA-BDDE هایدروجیل د PBS بفر سره فلټر شوی او منحل شوی ترڅو د HA غلظت له 10 څخه تر 25 mg/mL، او وروستی pH 7.4 ترلاسه کړي.د تولید شوي کراس سره تړلي HA هایدروجیلونو تعقیم کولو لپاره ، دا ټول هایدروجیلونه په اتوماتیک ډول (120 درجې C د 20 دقیقو لپاره) دي.پاک شوی BDDE-HA هایدروجیل تر تحلیل پورې په 4 ° C کې زیرمه کیږي.
د کراس سره تړلي HA محصول کې د BDDE شتون تحلیل کولو لپاره، د 240 ملی ګرامه نمونه وزن شوې او د مرکز سوري ته معرفي شوه (Microcon®؛ Merck Millipore, Billerica, MA, USA; حجم 0.5 mL) او د خونې د حرارت درجه کې په 10,000 rpm کې سینټرفیوج شوی. 10 دقیقې.په ټولیز ډول 20 µL د پل - ښکته مایع راټول او تحلیل شوي.
د الکلین شرایطو (1٪، 0.1٪ او 0.01٪ NaOH) الندې د BDDE معیار (Sigma-Aldrich Co) تحلیل کولو لپاره، که لاندې شرایط پوره شي، د مایع نمونه 1:10، 1:100، یا پورته ده. 1:1,000,000 که اړتیا وي، د تحلیل لپاره د ملی کیو ډیونیز شوي اوبه وکاروئ.
د پیل شوي موادو لپاره چې د کراس لینک کولو عکس العمل کې کارول کیږي (HA 2٪، H2O، 1٪ NaOH، او 0.049 mM BDDE)، د دې موادو څخه چمتو شوي 1 ملی لیتر د ورته تحلیل شرایطو په کارولو سره تحلیل شوي.
د آیون نقشه کې د څرګند شوي چوټیو ځانګړتیا معلومولو لپاره، د 100 ppb BDDE معیاري محلول (Sigma-Aldrich Co) 10 µL د 20 µL نمونې ته اضافه شوي.په دې حالت کې، په هر نمونه کې د معیار وروستی غلظت 37 ppb دی.
لومړی، د BDDE ذخیرې محلول د 11,000 mg/L (11,000 ppm) غلظت سره د 10 μL معیاري BDDE (Sigma-Aldrich Co) سره د 990 μL ملی کیو اوبو (کثافت 1.1 g/mL) سره کم کړئ.دا محلول د 110 µg/L (110 ppb) BDDE محلول د منځمهاله معیاري کمولو په توګه وکاروئ.بیا، د منځمهاله BDDE معیاري diluent (110 ppb) وکاروئ ترڅو د 75, 50, 25, 10, او 1 ppb مطلوب غلظت ترلاسه کولو لپاره څو ځله د منځګړی ډیلونټ کمولو سره معیاري وکر چمتو کړئ.لکه څنګه چې په 1 شکل کې ښودل شوي، دا معلومه شوه چې د BDDE معیاري وکر د 1.1 څخه تر 110 ppb پورې ښه خطي (R2> 0.99) لري.معیاري وکر په څلورو خپلواکو تجربو کې تکرار شو.
شکل 1 د BDDE معیاري کیلیبریشن وکر چې د LC-MS تحلیل لخوا ترلاسه شوی، په کوم کې چې ښه اړیکه لیدل کیږي (R2> 0.99).
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري.
د BDDE معیارونو پیژندلو او اندازه کولو لپاره چې د کراس سره تړل شوي HA او BDDE معیارونو په اساس حل کې شتون لري، د LC-MS تحلیل کارول شوی و.
د کروماتګرافیک جلا کول په LUNA 2.5 µm C18(2)-HST کالم (50×2.0 mm2؛ Phenomenex, Torrance, CA, USA) کې ترلاسه شوي او د تحلیل په جریان کې د خونې په حرارت درجه (25°C) کې ساتل شوي.په ګرځنده مرحله کې acetonitrile (solvent A) او اوبه (solvent B) شامل دي چې 0.1% فارمیک اسید لري.د موبايل مرحله د تدريجي تخريب په واسطه جلا کيږي.تدریجي په لاندې ډول ده: 0 دقیقې، 2٪ A؛1 دقیقه، 2٪ A;6 دقیقې، 98٪ A؛7 دقیقې، 98٪ A؛7.1 دقیقې، 2٪ A؛10 دقیقې، 2٪ A. د چلولو وخت 10 دقیقې دی او د انجیکشن حجم 20 μL دی.د BDDE د ساتلو وخت شاوخوا 3.48 دقیقې دی (د تجربو پراساس له 3.43 څخه تر 4.14 دقیقو پورې).ګرځنده مرحله د LC-MS تحلیل لپاره د 0.25 mL/min د جریان په نرخ پمپ شوې.
د MS لخوا د BDDE تحلیل او اندازه کولو لپاره، د UPLC سیسټم (واټرز) د API 3000 ټرپل کواډروپول ماس سپیکٹرومیټر (AB SCIEX) سره یوځای شوی چې د الیکټرو سپری ionization سرچینې سره سمبال شوی، او تحلیل په مثبت آیون حالت (ESI+) کې ترسره کیږي.
د BDDE په اړه ترسره شوي د آئن ټوټې تحلیل سره سم، د لوړې شدت سره ټوټه د 129.1 Da (شکل 6) سره مساوي ټوټه ټاکل شوې.له همدې امله، د مقدار کولو لپاره د ملټي آیون څارنې حالت (MIM) کې، د BDDE ډله ایز تبادله (د ډله ایز چارج نسبت [m/z]) 203.3/129.1 Da دی.دا د LC-MS تحلیل لپاره د بشپړ سکین (FS) حالت او د محصول آئن سکین (PIS) حالت هم کاروي.
د میتود ځانګړتیا تصدیق کولو لپاره، یو خالي نمونه (لومړني ګرځنده مرحله) تحلیل شوه.په خالي نمونه کې د 203.3/129.1 Da ډله ایز تبادلې سره هیڅ سیګنال ندی موندل شوی.د تجربې د تکرار وړتیا په اړه، د 55 ppb 10 معیاري انجیکشنونه (د کیلیبریشن وکر په مینځ کې) تحلیل شوي، په پایله کې د پاتې معیاري انحراف (RSD) <5٪ (ډیټا نه ښودل شوي).
د BDDE د پاتې کیدو مینځپانګه په اتو مختلف اتوماتیک شوي BDDE کراس پورې تړلي HA هایدروجیلونو کې اندازه شوې ، د څلورو خپلواکو تجربو سره مطابقت لري.لکه څنګه چې د "توکي او میتودونو" برخه کې تشریح شوي، مقدار کول د BDDE معیاري کمولو د ریګریشن منحني اوسط ارزښت لخوا ارزول کیږي، کوم چې د 203.3/129.1 Da د BDDE ډله ایز لیږد کې کشف شوي ځانګړي چوټۍ سره مطابقت لري، د ساتلو سره. وخت د 3.43 څخه تر 4.14 دقیقو پورې انتظار نه کوي.شکل 2 د 10 ppb BDDE حوالې معیار د کروماتګرام مثال ښیي.جدول 1 د اتو مختلف هایدروجیلونو پاتې BDDE مینځپانګې لنډیز کوي.د ارزښت حد له 1 څخه تر 2.46 ppb پورې دی.له همدې امله، په نمونه کې د پاتې BDDE غلظت د انساني کارونې لپاره د منلو وړ دی (<2 ppm).
شکل 2 د 10 ppb BDDE حواله معیار (Sigma-Aldrich Co) Ion chromatogram، MS (m/z) لیږد د 203.30/129.10 Da (په مثبت MRM حالت کې) د LC-MS تحلیل لخوا ترلاسه شوی.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه؛MS, ډله;m/z، د وزن څخه چارج نسبت.
یادونه: نمونې 1-8 د BDDE کراس سره تړلي HA هایدروجیل په اتوماتیک ډول تړل شوي دي.په هایدروجیل کې د BDDE د پاتې کیدو مقدار او د BDDE د ساتلو وخت لوړوالی هم راپور شوي.په نهایت کې ، د مختلف ساتلو وختونو سره د نوي چوټیو شتون هم راپور شوی.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA، hyaluronic اسید؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه؛tR، د ساتلو وخت؛LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛RRT، د اړونده ساتلو وخت.
په حیرانتیا سره، د LC-MS ion chromatogram تحلیل ښودلې چې د ټولو اتوماتیک کراس تړل شوي HA هایدروجیل نمونو پر بنسټ چې تحلیل شوي، د 2.73 څخه تر 3.29 دقیقو پورې د لنډ ساتلو په وخت کې اضافي لوړوالی شتون درلود.د مثال په توګه، شکل 3 د کراس سره تړلي HA نمونې د آئن کروماتګرام ښیي، چیرې چې د 2.71 دقیقو په مختلف ساتلو وخت کې اضافي چوټۍ ښکاري.د BDDE څخه د نوي مشاهده شوي چوټي او چوټي تر مینځ د مشاهده شوي نسبي ساتلو وخت (RRT) 0.79 (جدول 1) وموندل شو.له هغه ځایه چې موږ پوهیږو چې د LC-MS تحلیل کې کارول شوي C18 کالم کې نوې مشاهده شوې چوکۍ لږ ساتل کیږي ، نو نوې څوکۍ ممکن د BDDE په پرتله ډیر قطبي مرکب سره مطابقت ولري.
شکل 3 د کراس سره تړلي HA هایدروجیل نمونې د Ion کروماتگرام د LC-MS لخوا ترلاسه شوي (MRM ډله ایز تبادله 203.3/129.0 Da).
لنډیزونه: HA، hyaluronic اسید؛LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه؛RRT، د نسبي ساتلو وخت؛tR، د ساتلو وخت.
د دې احتمال د ردولو لپاره چې نوې څوکې لیدل شوي ممکن ککړونکي وي چې په اصل کې کارول شوي خامو موادو کې شتون لري، دا خام مواد هم د ورته LC-MS تحلیل میتود په کارولو سره تحلیل شوي.د تحلیل شوي ابتدايي موادو کې اوبه شاملې دي، په اوبو کې 2٪ NaHA، په اوبو کې 1٪ NaOH، او BDDE په ورته غلظت کې چې د کراس لینک کولو غبرګون کې کارول کیږي.د کارول شوي پیل شوي موادو آئن کروماتگرام هیڅ کوم مرکب یا چوکۍ نه وه ښودلې، او د ساتلو وخت یې د لیدل شوي نوي چوټي سره مطابقت لري.دا حقیقت دا نظر ردوي چې نه یوازې پیل شوي توکي ممکن کوم مرکبات یا مادې ولري چې ممکن د تحلیل پروسې سره مداخله وکړي ، مګر د نورو لابراتوار محصولاتو سره د احتمالي کراس ککړتیا نښه شتون نلري.د غلظت ارزښتونه چې د BDDE د LC-MS تحلیل وروسته ترلاسه شوي او نوي چوټونه په 2 جدول کې ښودل شوي (نمونې 1-4) او د آیون کروماتگرام په 4 شکل کې ښودل شوي.
یادونه: نمونې 1-4 د خامو موادو سره مطابقت لري چې د اتوماتیک BDDE کراس سره تړلي HA هایدروجیل تولید لپاره کارول کیږي.دا نمونې په اتوماتیک ډول نه وې.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA، hyaluronic اسید؛LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه.
شکل 4 د خامو موادو نمونې د LC-MS کروماتگرام سره مطابقت لري چې د HA او BDDE د کراس لینک کولو عکس العمل کې کارول کیږي.
یادونه: دا ټول په ورته غلظت او تناسب کې اندازه کیږي چې د کراس لینک کولو عکس العمل ترسره کولو لپاره کارول کیږي.د کروماتوګرام لخوا تحلیل شوي د خامو موادو شمیرې د دې سره مطابقت لري: (1) اوبه، (2) 2٪ HA آبي محلول، (3) 1٪ NaOH آبي محلول.د LC-MS تحلیل د 203.30/129.10 Da (په مثبت MRM حالت کې) د ډله ایز تبادلې لپاره ترسره کیږي.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;HA، hyaluronic اسید؛LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه.
هغه شرایط چې د نویو څوکو رامینځته کیدو لامل شوي مطالعه شوي.د دې مطالعې لپاره چې څنګه د عکس العمل شرایط د کراس سره تړلي HA هایدروجیل تولید لپاره کارول کیږي د BDDE کراس لینک کولو اجنټ عکس العمل اغیزه کوي ، چې د نوي چوټیو رامینځته کیدو لامل کیږي (ممکنه محصولات) ، مختلف اندازه کول ترسره شوي.په دې تعهداتو کې، موږ د BDDE وروستی کراس لینکر مطالعه او تحلیل کړ، کوم چې د NaOH (0٪، 1٪، 0.1٪، او 0.01٪) د مختلفو غلظت سره په اوبو کې مینځل شوی، وروسته د اتوماتیک کولو وروسته یا پرته.د ورته شرایطو د تقلید لپاره د باکتریا کړنلاره د هغه میتود په څیر ده چې د کراس سره تړلي HA هایدروجیل تولید لپاره کارول کیږي.لکه څنګه چې د "توکي او میتودونو" برخې کې تشریح شوي، د نمونې ډله ایز لیږد د LC-MS لخوا 203.30/129.10 Da ته تحلیل شوی.د BDDE او د نوي چوټي غلظت محاسبه کیږي، او پایلې یې په 3 جدول کې ښودل شوي. په نمونو کې کومه نوې څوکه نه ده موندل شوې چې په اتوماتیک ډول نه وي موندل شوي، پرته له دې چې په محلول کې د NaOH شتون په پام کې ونیول شي (نمونې 1-4، جدول ۳).د اتوماتیک نمونو لپاره، نوې چوټۍ یوازې په محلول کې د NaOH په شتون کې کشف شوي، او داسې ښکاري چې د څوکۍ جوړښت په محلول کې د NaOH غلظت پورې اړه لري (نمونې 5-8، جدول 3) (RRT = 0.79).شکل 5 د آیون کروماتګرام یوه بیلګه ښیي، د NAOH شتون یا نشتوالي کې دوه اتوماتیک نمونې ښیي.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه.
یادونه: پورتنۍ کروماتگرام: نمونه د 0.1٪ NaOH آبي محلول سره درملنه شوې او په اتوماتیک ډول (120 درجې د 20 دقیقو لپاره) درملنه شوې.لاندینۍ کروماتگرام: نمونه د NaOH سره درملنه نه وه شوې، مګر په ورته شرایطو کې په اتوماتیک ډول ساتل کیږي.د 203.30/129.10 دا ډله ایز تبادله (په مثبت MRM حالت کې) د LC-MS لخوا تحلیل شوی.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه.
په ټولو اتوماتیک نمونو کې، د NaOH سره یا پرته، د BDDE غلظت خورا کم شوی (تر 16.6 ځله) (نمونې 5-8، جدول 2).د BDDE غلظت کې کمښت ممکن د دې حقیقت له امله وي چې په لوړه تودوخه کې اوبه کولی شي د بیس (نیوکلیوفیل) په توګه عمل وکړي ترڅو د BDDE د ایپوکسایډ حلقه خلاص کړي ترڅو د 1,2-diol مرکب رامینځته کړي.د دې مرکب د مونوسوتوپک کیفیت د BDDE څخه توپیر لري او له همدې امله به اغیزه ونلري.LC-MS د 203.30/129.10 Da ډله ایز بدلون کشف کړ.
په نهایت کې، دا تجربې ښیي چې د نویو چوټو نسل د BDDE، NAOH، او د اتوماتیک کولو پروسې شتون پورې اړه لري، مګر د HA سره هیڅ تړاو نلري.
د نږدې 2.71 دقیقو د ساتلو په وخت کې موندل شوی نوی چوټی بیا د LC-MS لخوا مشخص شوی.د دې هدف لپاره، BDDE (9.9 mg/mL) په 1٪ NaOH آبي محلول کې ځای پرځای شوي او په اتوماتيک ډول بند شوي.په 4 جدول کې، د نوي چوټي ځانګړتیاوې د پیژندل شوي BDDE حوالې چوکۍ سره پرتله شوي (د ساتلو وخت نږدې 3.47 دقیقې).د دوو چوټیو د آئن ټوټې کولو تحلیل پراساس، دې پایلې ته رسیدلی شي چې د 2.72 دقیقو د ساتلو وخت سره د BDDE څوکۍ ورته ټوټې ښیي، مګر د مختلف شدت سره (شکل 6).د 2.72 دقیقو د ساتلو وخت (PIS) سره مطابقت لرونکي چوکۍ لپاره ، د 147 Da په ډله کې د ټوټې کیدو وروسته یو ډیر شدید لوړوالی لیدل شوی.د BDDE غلظت (9.9 mg/mL) کې چې په دې تعیین کې کارول کیږي، په الټرا وایلیټ طیف کې د جاذبې مختلف حالتونه (UV, λ=200 nm) هم د کروماتګرافیک جلا کیدو وروسته لیدل شوي (شکل 7).د 2.71 دقیقو د ساتلو وخت سره لوړوالی لاهم په 200 nm کې لیدل کیږي، پداسې حال کې چې د BDDE لوړوالی په ورته شرایطو کې په کروماتگرام کې نشي لیدل کیدی.
جدول 4 د نوي چوټي ځانګړتیا پایلې د ساتلو وخت شاوخوا 2.71 دقیقې او د BDDE چوکۍ د 3.47 دقیقو ساتلو وخت سره
یادونه: د دې پایلو ترلاسه کولو لپاره، د LC-MS او HPLC تحلیلونه (MRM او PIS) په دوو چوټو کې ترسره شوي.د HPLC تحلیل لپاره، د 200 nm طول موج سره د UV کشف کارول کیږي.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;HPLC، د لوړ فعالیت مایع کروماتګرافي؛LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه؛m/z، د وزن څخه چارج نسبت؛PIS، د محصول آیون سکینګ؛الټراوائلیټ رڼا، الټرا وایلیټ رڼا.
یادونه: ډله ایزې ټوټې د LC-MS تحلیل (PIS) لخوا ترلاسه کیږي.غوره کروماتگرام: د BDDE معیاري نمونې ټوټې ډله ایز سپیکٹرم.لاندې کروماتگرام: د نوي چوټي ډله ایز سپیکٹرم کشف شوی (RRT د BDDE څوکۍ سره تړاو لري 0.79 دی).BDDE په 1٪ NaOH محلول کې پروسس شوی او اتوماتیک شوی.
لنډیزونه: BDDE، 1,4-butanediol diglycidyl ether;LC-MS، مایع کروماتګرافي او ډله ایز سپیکرومیټري؛MRM، د څو غبرګونونو څارنه؛PIS، د محصول آیون سکین؛RRT، د اړونده ساتلو وخت.
شکل 7 د 203.30 Da precursor ion د Ion کروماتوګرام، او (A) د 2.71 دقیقو د ساتلو وخت سره نوی چوټی او (B) د UV کشف د BDDE حوالې معیاري چوکۍ په 3.46 دقیقو کې په 200 nm کې.
په ټولو کراس پورې تړلي HA هایدروجیل تولید شوي، دا لیدل شوي چې د LC-MS مقدار کولو وروسته د پاتې BDDE غلظت <2 ppm وو، مګر په تحلیل کې یو نوی نامعلوم لوړوالی څرګند شو.دا نوې چوکۍ د BDDE معیاري محصول سره سمون نلري.د BDDE معیاري محصول هم د ورته کیفیت تبادله (MRM تبادله 203.30/129.10 Da) په مثبت MRM حالت کې تحلیل کړی.عموما، نور تحلیلي میتودونه لکه کروماتګرافي په هایدروجیلونو کې د BDDE کشف کولو لپاره د محدود ازموینې په توګه کارول کیږي، مګر د اعظمي کشف حد (LOD) د 2 ppm څخه لږ څه کم دی.له بلې خوا، تر دې دمه، NMR او MS د کراس تړل شوي HA محصولاتو د شوګر واحد په برخو کې د کراس لینک کولو او / یا د HA تعدیل درجې مشخص کولو لپاره کارول شوي.د دې تخنیکونو هدف هیڅکله په دومره ټیټ غلظت کې د پاتې BDDE کشف اندازه کول ندي لکه څنګه چې موږ پدې مقاله کې تشریح کوو (زموږ د LC-MS میتود LOD = 10 ppb).